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非洲猪瘟

      非洲猪瘟( African swine fever,ASF)是猪的一种病毒病,其特征是死亡率高,皮肤有变红的区域和内脏器官严重出血。其病型可分为最急性、急性、亚急性、慢性和隐性型。临床症状与古典型猪瘟十分相似,只有用实验室方法才能进行可靠的鉴别诊断。非洲猪瘟是世界动物卫生组织(OIE)规定的15种A类传染病之一。

      非洲猪瘟1909年在东非肯尼亚首次在欧洲移民带来的家猪群中被发现后,1909-1912年共暴发了15次,死亡率高达98.9%。1933年在南非西开普省的1100头猪群中再度暴发。1957年该病在葡萄牙发生,这是首次在非洲大陆以外地方发生,对全球形成了威胁。1960年传到了西班牙,1964年又在法国暴发,1967年该病侵入意大利。此后,1978年又相继在兰相继暴发此病。至今非洲猪瘟在西班牙、葡萄牙和意大利及非洲一些国家仍然时有发生。该病给一些国家的养猪业带来了巨大的经济损失,有些国家的养猪业甚至受到了毁灭性的打击。我国是世界上养猪最多的国家,虽然至今尚未发生该病,但在国际贸易和旅游活动日益频繁的今天,应对该病的传人保持高度警惕,必须严加防范。

一、病原学

      非洲猪瘟病毒(ASFV)过去在分类上划为虹彩病毒科,原因是它们的形态相似,但其DNA结构及复制方式则与痘病毒相似。因此,1995年第六次国际病毒分类委员会( ICTV)报告将其归为痘病毒科的类非洲猪瘟病毒属。也有人建议将其单独列为非洲猪瘟病毒科。它是目前惟一的DNA虫媒病毒。至今还没有发现与ASFV血清学相关的病毒。成熟的ASFV直径约为175~220nm,完整的病毒颗粒氧年又在多米尼加和海地发生。1985年比利时和1986年荷化铯浮密度为1.23g/cm3。病毒粒子呈20面体对称,外有囊膜,衣壳内部呈几个同心圆结构。基因组为双股的线状DNA,大小为170~190kb。DNA分子具有共价的闭合末端,并有倒置末端重复子及发夹结构。基因组的中央部分约有150kb为保守区,而末端为可变区。全基因序列由170101个核苷酸组成,有151个开放阅读框,编码5个多基因群。ASFV是一个很复杂的病毒,已被鉴定的结构蛋白有28种,在被感染的巨噬细胞中,已被鉴定出100种以上的病毒诱导蛋白,其中至少50种能与感染猪或康复猪的血清反应,40种能与病毒粒子相结合。这些蛋白如 P73、P54、P30和P12有很好的抗原性。虽然还不清楚这些蛋白在诱导保护性免疫反应中所起的作用,但它们是很好的抗原,可用于ASF的血清学诊断。

      在猪体内ASFV可在几种类型的细胞胞浆中,尤其是在网状内皮细胞和单核巨噬细胞中复制。该病毒能在钝缘蜱体内增殖,并且钝缘蜱主要的传播媒介。

      初次分离病毒时,可用猪的白细胞和骨髓细胞培养,当适应后,即可用一些传代细胞系,如 PK-15、MVPK、Vero、BHK-21等细胞进行繁殖。在用外周血的巨噬细胞培养分离病毒时,这些培养物中的红细胞被感染细胞吸附形成玫瑰花状或桑套体状,这种现象是特异性的。

      ASFV在自然环境中抵抗力很强,从放在室温下15周的腐败血清中及放在4℃18个月到6年的血液中能分离到此病毒,还从加工后贮存5个月的火腿和贮存了6个月的火腿的骨髓中发现了ASFV。暴发非洲猪瘟后全群扑杀的猪场圈舍中3个月后仍能发现病毒。某些毒株在pill.9~13.4范围内2h或更长时间内可保持活性。在60℃20min及在多数脂溶剂中可灭活 ASFV。

      经交叉免疫试验、红细胞吸附抑制试验和病毒基因组的限制性酶切分析,表明各个病毒分离物之间存在着明显的差异,但有些抗原蛋白,如主要结构蛋白W73是所有病毒分离物都存在并且是相当稳定的。在感染ASFV的动物血清中,发现有沉淀抗体、补体结合抗体和红细胞吸附抗体,也能发现中和抗体。

二、流行病学

      至今,只发现猪和钝缘蜱(Ornithodoros)可自然感染ASFV。在非洲已多次从统猪和丛林猪中分离到ASFV。除此之外,还发现其他地区野生猪科动物可感染ASFV,如欧洲野猪和美国东南部野猪。西班牙一个调查表明,因家猪接触野猪引起的ASF暴发占5.8%。现已证明,钝缘蜱可将ASFV实验性地传播给健康易感猪。在疵猪洞穴里采集的毛白钝缘蜱(Ornithodoros moubata)或叫猪钝缘蜱猪亚种(Or- nithodoros porcinusporcmus)中分离到了ASFV,并明确了病毒在蜱体内的生长期以及在交配和卵中的传播方式。毛白钝缘蜱具有真正生物媒介的一切特性,在蜱中能水平传播和垂直传播。通过食入感染组织传播病毒已被证实。现已确认,经带毒的毛白钝缘蜱的叮咬可将病毒传给家猪。

      一旦ASF发生于家猪就会通过家猪之间的直接接触而传播。因为病毒在血液、尿和粪中非常稳定,所以通过人、车辆、生产工具机械性传播病毒是完全可能的。最近研究表明,在短距离内可以发生空气传播。本病的远距离传播几乎总是因为感染猪的转移或饲喂含有感染猪组织的残羹而引起。由于这种病毒能保留在经加工的猪肉制品中,因此用国际航班、轮船上的泔水和剩余食物喂猪常可导致本病发生。近年来暴发的ASF大多是由于猪场饲喂了国际航班上的潜水而引起的。

三、临床症状

      自然感染的潜伏期为5~15d。人工感染根据病毒剂量和感染途径,为2~5d。

      临床症状上本病与其他几种猪病尤其是猪瘟和猪丹毒有相似之处。根据病毒毒力、感染剂量和感染途径,本病的临床表现差别很大,从最急性型到隐性型各种现象都有,分述如下。

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      1.最急性型    常未见任何症状就突然死亡,有时可见体温升至41~42℃,呼吸急促,皮肤充血、出血,病猪死亡率可达100%。猪一旦被感染,体温突然升高至40.5℃,高热持续4d,饮食活动不见异常,随后体温下降,才开始出现全身衰弱,腹泻,便血(图2.2.15-1),耳、背部皮肤有紫绀区(图2.2.15-2),鼻孔出血(图2.2.15-3),白细胞常减少。

      2.急性型    在4~6d的潜伏期后病猪可见突然高热,持续3~4d后有些猪死亡,有些猪继续高热。在发热初期,病猪表现正常,能继续采食。后即表现厌食,显著委顿,站立困难,行动无力,呼吸急促,时有咳嗽,皮肤充血并发绀,尤其是耳部、肢端和腹部皮肤,呈范围广泛不规则形的淤斑、血肿和坏死斑。病后期常发生严重的出血性肠炎,可出现腹泻和血便。死亡常在出现高热的7d内发生,在死亡前24h内,常见体温显著下降,病猪昏迷不醒。

       3.亚急性型    症状与急性型很相似,差别在病的严重程度和病期的长短。6~12d潜伏期后,病猪体温升高,高热可能持续几天,或者体温呈不规则的波动。母猪常见有流产现象。病猪常在症状出现后6~10d内死亡,死亡率可达60%~90%。

      4.慢性型    病猪一般表现委顿,体温39.5~40.5℃,呈不规则波浪热,还可见肺炎、呼吸困难等。皮肤可见坏死、溃疡、斑块或小结,耳、关节、尾巴和鼻、唇等处可见坏死性溃疡脱落。腿关节呈无痛性软性肿胀,也见于颈部。病程可持续1月或数月,或除生长缓慢外,无其他任何症状。大部分病猪都能康复,并终身带毒。

      5.隐性型    在非洲野猪中很常见,在家猪中可能是由于感染了低毒力野毒所致,或是由于亚急性或慢性型康复后演变而成。常为散发性病例,病程缓慢,外观体征健康,并无异常,实际上带毒,临诊无法确诊。这类隐性带毒猪有引起本病流行的潜在危险,必须引起高度警惕。

四、病理变化
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     ASFV通常经由口鼻途径传递,蜱的叮咬,皮肤擦伤,肌肉、皮下、静脉和腹腔注射均可引起感染。病毒首先感染扁桃体和颌下淋巴结的单核细胞和巨噬细胞,随后通过该部的淋巴液和血液而到达靶器官(淋巴结、骨髓、脾、肺、肝和肾),进一步增殖。感染后6~8d形成病毒血症,并维持很长一段时间。

      病毒能与红细胞和血小板结合,在感染猪体内导致吸附血细胞。病猪的出血现象主要是由于血管的通透性增强所致。急性病例中淋巴细胞减少的机理与淋巴器官的T区淋巴细胞凋亡有关,但还不能证明病毒能在T细胞和B细胞中复制。在急性和亚急性型后期,肺血管内巨噬细胞激活而引起肺泡水肿,是死亡的主要原因。

      眼观病理变化:淋巴结严重出血,尤以胃(图2.2.15-4)、肝、肾、肠等所属淋巴结最为严重;脾严重充血、肿大,可达正常脾的5倍以上,呈黑紫色、质度柔软(图2.2.15-5);肺水肿及充血,有实变(图2.2.15-6);心包腔中积有大量液体。喉头黏膜发绀,会厌软骨见出血斑点,偶见水肿;气管前部的黏膜散在小出血点,气管、支气管腔中积有大小不等的泡沫。心肌柔软,心外膜及心内膜下散在小出血点,有时可见广泛出血,心肌常见出血(图2.2.15-7)。胃和肠黏膜有炎症和斑点状或弥漫性出血变化(图2.2.15-8),或有溃疡。肝脏淤血,实质变性,与胆囊接触部间质水肿。胆囊肿大、充满胆汁,胆囊壁因水肿而明显增厚,其浆膜和黏膜有出血斑点。肾脏出血一般比猪瘟轻(图2.2.15-9)。约30%病例的膀胱黏膜有出血点(图2.2.15-10)。脑膜充血、出血。

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      组织学变化:镜下单核细胞的核破碎是非洲猪瘟组织炎症变化的特征,淋巴结触片可见单核细胞严重核破碎。

      淋巴组织变性是急性ASF最突出的显微病变,常可见皮质、髓质区和滤泡间区有固缩的细胞核。在亚急性和慢性病例中,淋巴结、脾和肝窦的网状内皮细胞的增生是特征性变化。

五、诊断

      ASF的症状、病变与其他出血性猪病如猪瘟、猪丹毒、败血性沙门氏菌病等相似,它们的亚急性型和慢性型在生产现场实际上是无法区别的,因而必须用实验室方法才能确诊。现场如果发现尸体剖检的猪出现脾和淋巴结严重出血,形如血肿,结合流行病学资料,可以初步怀疑为ASF。

      在实验室诊断中,ASFV抗原的检测常用红细胞吸附试验(HAD)、直接免疫荧光试验(DIF)和琼脂扩散沉淀试验( AGP)。一般认为,HAD是ASF确诊性的鉴别试验,并且是从野外样品分离病毒应用最广泛的方法。用DIF可在组织抹片和冷冻组织切片,在lh内检出病毒。

      ASFV抗体检测常用的是间接免疫荧光试验( OIF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹测定(IB)等。

      非洲猪瘟诊断的一般程序:疑似非洲猪瘟的样品送到实验室后,通常是用直接免疫荧光试验来检测病毒抗原和用间接免疫荧光试验检测血清中或组织浸出液中的抗体。做这两种试验只需数小时,且此两种方法联用的检出率可达95%~98%。样品量很大时,可用酶联免疫吸附试验来检测抗体。检测出阳性结果后,如样品来自非疫区,还必须做动物接种试验。在任何情况下必须以两种或两种以上不同方法的结果为依据才能确诊。为此,送实验室的样品必须有足够的量。初诊要送检肝、脾、淋巴结、全血和血清,并要妥善保存。无非洲猪瘟的国家,其检验结果,还应设法得到国际公认的非洲猪瘟咨询实验室的确诊。

      PCR技术:DNA的检测是用病毒基因组的高度保守区基因片段作为引物的,利用PCR技术对分离到的ASFV毒株进行检测是可行的。人们已经用PCR技术从所有已知的ASFV分离株进行病毒基因型鉴定,其中包括那些低毒力毒株以及不能产生红细胞吸附现象的毒株。此法特别对那些不适用其他诊断试验的样品(例如存在于腐败组织中已灭活的或已降解的ASFV)中的DNA鉴定有应用价值。其阳性对照使用克隆的病毒DNA来代替活病毒,所以更为安全。在ASF诊断技术中,这是一种既快速又准确的新方法。

六、防制措施

      目前尚无有效的疫苗可供应用。灭活苗对猪没有任何保护作用。弱毒疫苗虽然可以保护部分猪对同源毒株的攻击,但也有些猪可能成为带毒猪或出现慢性病变。西班牙和葡萄牙的成功经验证明,在扑灭本病的方案中,疫苗不是主要的,在流行地区疫苗的作用也很有限。特异性抗体似乎不能中和病毒。核苷酸全序列分析研究有可能找到与保护性免疫有关的某些基因。

      由于上述原因,在无本病的地区或国家要极力阻止ASFV的侵入,在港口和国际机场等场所要严加防范。我国尚未发现本病,要严禁从疫区进口活猪及其产品。加强血清学检查,应认识到感染低毒株的猪不会显示病状或病变。确诊为感染本病猪群必须全部扑杀。凡无本病的国家怀疑发生本病,由于诊断需时较长,可不必等待实验室诊断结果,扑杀怀疑猪场的全部猪群,并采取适当的兽医卫生措施,防止疫情扩散。消毒可使用热氢氧化钠液(80~85℃)喷洒,或用1.5%甲醛溶液或含有5%活性氯的消毒剂喷洒,每平方米表面用药液1000mL,并保持3h。

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