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猪水疱病

      猪水疱病(Swine vesicular disease,SVD)是由猪水疱病病毒(Swine vesicular diseasevirus,SVDV)引起的一种急性接触性传染病,该病的流行性强,发病率高。它的主要临床特征是以蹄冠、蹄叉出现水疱为特征,偶尔在唇、舌、口部、鼻端和腹部及乳头周围皮肤也发生水疱。此病在临床上很难与口蹄疫、水疱性口炎、水疱疹相区别,但牛、羊等家畜不发生本病。人工感染马也不发病,但可致乳鼠发病。

      1973年世界动物卫生组织(OIE)和欧洲口蹄疫委员会先后召开会议,确认其为一种新病,正式定名为“猪水疱病”(Swine vesicular disease, SVD),要求各国加强控制,凡发现此病,必须通报OIE,并其将列为A类法定传染病之一。在我国《家畜家禽防疫条例实施细则》中SVD也被列为一类传染病。

一、病原

      猪水疱病病毒(Swine vesicular disease virus,SVDV)属小RNA病毒科(Pieornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)的成员。与同属的人类柯萨奇病毒(Humancoxsackievirus) BS型生物学特性十分相似。

      病毒粒子呈球形,直径22~32nm,无类脂质囊膜,沉降系数150S。病毒粒子在细胞质内呈晶格排列,在病变细胞质的空泡内凹陷处呈环形串珠状排列,衣壳二十面体对称,病毒基因组为正向单股RNA,有四种结构蛋白,即1A (VP4)、1B(VP2)、1C( VP3)和1D (VPl),1A为紧靠病毒核酸的内壳蛋白,1B、1C、1D为外壳蛋白。该病毒无囊膜,只有一种血清型。

      通过细胞培养物中和试验、乳鼠脑内接种中和试验及琼脂扩散试验证明:SVDV均可被人的肠道柯萨奇BS型病毒抗血清所中和,应用人肠道柯萨奇 BS型病毒与SVD病猪康复血清做中和试验时,也出现明显的交叉中和现象。感染人肠道柯萨奇BS型病毒的猪不产生临床症状,但可产生高效价的中和抗体,这说明该病毒在猪体内是有活性的。迄今尚、未有人类感染SVDV的报道,但与SVD病畜有接触史或从事过此项工作的人的体内确能查到高效价的 SVDV抗体。上述结果似乎可以说明SVDV在人与猪之间传播的可能性。据此,有人推论:SVDV很可能来源于人。

      本病毒能在仔猪肾、仓鼠肾原代细胞和IBRS2系、PK15和人羊膜传代细胞上生长。连传数代后,在这些细胞上能产生明显的细胞病变,适应毒出现的病变早,接毒后6h即可见到细胞病变,24h细胞几乎全部崩解;一般病毒出现病变较晚,24h在细胞质内出现颗粒,细胞变圆,48h细胞单层全部脱落。本病毒对中仓鼠、豚鼠、兔肾细胞、BHK21传代细胞、牛甲状腺细胞、猪甲状腺细胞等均不感染。

      将病毒接种l~2日龄乳小鼠或乳仓鼠,可引起  痉挛、麻痹等神经症状,在接种3~10d后死亡。接  种成年小鼠、仓鼠、兔均无反应,但能产生中和抗  体。豚鼠足踵接种不表现症状,可制备诊断用的抗  血清。病毒在淋巴结含量最高,其次是脑、脊髓、  肝、肾等。这些器官一般可做为送检的病料。本病  毒可凝集家兔、豚鼠、牛、绵羊、鸡、鸽等动物的  红细胞,但不能凝集人的红细胞。

      本病毒对乙醚和酸稳定,在污染的猪舍内可存活8周以上,在病猪粪便内12~17℃可贮存130d,病猪腌肉3个月后仍可分离出病毒,在低温下可保存2年以上。本病毒不耐热,60℃30min和80℃lmin即可灭活。

      本病毒对消毒药抵抗力较强,常用消毒药在常规浓度下短时间内不能杀死本病毒。pH值在2~12.5之间都不能使病毒灭活。3%来苏儿、0.1%新洁尔灭、10%生石灰乳消毒效果均不佳。消毒药中以福尔马林和氨水的效果最好。其次是火碱、漂白粉、生石灰和冰醋酸等。SVDV主要分布于舌、鼻盘、唇、蹄的上皮、心肌、扁桃体、淋巴结和脑干等组织。

二、流行病学

      1.易感性    各种年龄、品种的猪均可感染发病,其他偶蹄家畜均不感染,人工接种兔、豚鼠、禽、大鼠、小鼠以及马、驴等动物都不发病,但能产生中和抗体(禽类不明显)。人类有一定的感受性,偶尔也可被感染,但不产生水疱,其症状与人的B5型柯萨奇病毒感染相似。

      2.传染源    发病猪、潜伏期猪和病愈带毒猪及其产品是本病的主要传染源,病猪与健猪同舍接触1~2d,即可在鼻黏膜、咽、直肠检出病毒,经3天可在血清中出现病毒。在病毒血症阶段,各脏器均含有病毒,带毒的时间,鼻7~10d,口腔7~8d,咽8~12d,淋巴结和骨髓15d以上,水疱皮带毒持续20d。牛、羊接触本病毒虽然不发病,也无临床症状,但可以短期带毒,并能从其咽部、乳汁和粪便中分离到病毒,绵羊血清中也可检查出SVDV中和抗体。对于牛、羊能否成为传染源以及在传播中的作用尚无定论,但机械传播是可能的。

      3.传播途径    病毒主要经破损的皮肤、消化道、呼吸道侵入猪体,感染主要是通过接触\饲喂含病毒的泔水和屠宰下脚料、牲畜交易、运输工具(被污染的车辆)等。

      4.流行特点    本病一年四季均可发生,但多见于春、冬两季。在猪群高度密集、调运频繁的猪场,传播较快,发病率亦高,可达70%~80%,首次发生本病时,发病率可高达100%,但死亡率很低。在密度小、地面干燥、阳光充足、分散饲养的情况下,很少引起流行。

      5.发现历史与流行现状    本病1966年于意大利首次被发现,1971年曾发生于香港,1972年意大利再次发生。随后相继在英国、奥地利、法国、波兰、比利时、德国、日本、瑞士、匈牙利、罗马尼亚、马耳他、保加利亚和原苏联等国家流行过。本病传播迅速,流行广,曾给养猪业带来严重损失。自20世纪70年后期起,由于各国采取了有力的防制措施,使本病得到了有效控制。目前,该疾病在部分国家和地区虽仍有发生,但均未造成大的流行和损失。本病除可引起初生仔猪死亡外,通常在无继发感染的情况下死亡率很低。

三、临床症状
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      自然感染潜伏期为2~5d,有时为7~8d,而人工感染时,最早为30h。发病后首先出现原发性水疱,5~6d后出现继发性水疱。临床上SVDV株的毒力各不相同,因此,据症状和病程该病可分为以下三种病型。典型水疱病:其特征性的水疱常见于主趾和附趾的蹄冠上(图2.2.12-1)。有一部分猪体温升高至40~42℃,上皮苍白肿胀,在蹄冠和蹄踵的角质与皮肤结合处首先见到。在36~48h,水疱明显凸出,大小如黄豆或蚕豆,大小不等,里面充满水疱液,继而水疱融合,很快发生破裂,形成溃疡(图2.2.12-2),真皮暴露形成鲜红颜色,病变常环绕蹄冠皮肤的蹄壳,导致蹄壳裂开,严重时蹄壳可脱落。病猪疼痛剧烈,跛行明显,严重的病例,由于继发细菌感染,局部化脓,导致病猪卧地不起或呈犬坐姿式。严重者用膝部爬行,食欲减退,精神沉郁。水疱有时也见于鼻盘、舌、唇(图2.2.12-3、4)和母猪的乳头上。仔猪多数病例在鼻盘上出现水疱。一般情况下,如无并发其他疾病不易引起死亡,病猪康复较快,病愈后两周,创面可完全痊愈,蹄壳脱落,则相当长的时间才能恢复。初生仔猪发生本病可引起死亡。有的病猪偶可出现中枢神经系统紊乱症状,表现为前冲、转圆、用鼻摩擦或用牙齿咬用具、眼球转动,个别出现强直性痉挛。

      轻型:只有少数猪,只在蹄部发生一、二个水疱,全身症状轻微,传播缓慢,并且恢复很快,一般不引起察觉。

      隐性型:不表现任何临床症状,但血清学检查,有滴度相当高的中和抗体,能产生坚强的免疫力,这种猪可能排出病毒,对易感猪有很大的危险性,所以应引起重视。

      本病的眼观病变主要在蹄部,约有10%的病猪口腔、鼻端亦有病变,口部水疱通常比蹄部出现晚。病理剖检,通常内脏器官无明显病变,仅见局部淋巴结出血和偶见心内膜有条纹状出血。

四、发病机理

      猪感染本病后,经过潜伏期,即可在蹄部等部位出现原发性水疱,水疱中的病毒造成局部细胞肿胀、坏死、崩解,并迅速通过细胞间传递而波及周围区域的众多细胞,继而造成更多的细胞水肿、坏死、崩解,产生继发性水疱。继发性水疱的破溃使上皮穿孔,形成破溃创面。病猪及破溃后的水疱液污染食物和环境,使易感猪感染,形成新的传染源,由此造成疾病的传播。蹄部皮肤是本病的主要靶器官,上皮病变的病理发生机理可分为两个过程:一是细胞死亡和由于皮肤棘细胞层松懈丧失了结合力;二是显著细胞内水肿导致上皮细胞的网状变性。具体过程:病毒侵入皮肤表皮细胞胞浆内,脱去衣壳,并以RNA为模板进行逆转录并大量复制和组装子代病毒粒子,病毒在细胞内增殖很快,使细胞物质代谢障碍并导致胞浆内细胞和微细胞结构破坏。细胞能量不足,氧化不全产物大量积聚,结果导致细胞内液积留和外液渗入,形成镜下可见的水疱。随着溶酶体的破坏和水解酶的释放,造成胞浆蛋白溶解,使整个细胞变成一个水疱,许多水疱变性的细胞融合在一起,从而形成肉眼可见的大小不一的水疱。

五、病理变化

      组织学检查:不论病猪生前有无神经症状,组织学检查脑组织均可见到轻度或中度的弥散性的非化脓性脑脊髓炎变化,有以淋巴细胞浸润为主的血管套和神经胶质细胞增生灶,出血不明显。大脑中部病变较背部严重,小脑内的病变仅局限于第四脑室的顶部,脊髓受害一般不严重,脑膜含有大量的淋巴细胞,血管嵌边明显,多数为网状组织细胞,少数为淋巴细胞和嗜伊红细胞。血管壁一般不受侵害。脑灰质和白质发现软化病灶,脊髓实质有类似变化。神经细胞周围的套细胞有些肥大和增殖,在套细胞内核染色体周围可发现圆形或卵圆形呈酸碱两性染色的核内包涵体。这种包涵体也可见于视神经束细胞内。在电镜下可见包涵体有一层膜,但没有本病病毒。蹄部皮肤开始表现为表皮鳞状上皮(包括毛囊上皮)发生空泡变性、坏死和形成小水疱,棘细胞层的细胞排列松散,细胞间隙比正常清晰,以后细胞相互分离,并发生浓缩和坏死。真皮乳头层小血管充血、出血、水肿和血管周围有淋巴细胞、单核细胞、浆细胞及少数嗜酸性白细胞浸润,炎症逐渐向表皮层扩展。以后水疱破裂形成浅表溃疡,表面棘细胞及颗粒层细胞发生凝固性坏死,变成均质无结构物质,附在溃疡表面,溃疡底部有炎症反应。

      除皮肤病变外,猪水疱病病毒也能侵袭黏膜组织,病猪的肾盂及膀胱黏膜上皮发生水疱变性,膀胱黏膜下水肿,小血管充血,有时胆囊黏膜亦可发生炎症变化。另外,心、肝、肾等实质器官发生程度不等的实质变性。心肌纤维有时有少数小出血灶,血管内皮细胞肿胀、增生。肾小管上皮细胞颗粒变性和空泡变性较明显。腹股沟淋巴结肿胀,被膜下浆膜浸润和散在出血区。

六、诊断

      本病一般与猪口蹄疫、猪水疱性口炎、猪水疱性疹、猪痘等病在临床症状上极为相似,从水疱形态上很难鉴别,诊断上一定要紧密结合流行病学、临床症状和实验室检验,才能很好的把握本病,以免造成大的危害,主要区别见表(口蹄疫)。因此发生猪的水疱性疾病时应立即采集病变样品进行实验室诊断,以确诊疫病的种类。常用的SVD实验室诊断方法有以下几种。本病定性由国家动物疾病检测中心负责。    

(一)动物接种

      病毒分离鉴定,取病猪发病初期的舌、鼻盘、唇或蹄部的水疱皮及病死猪的心肌、扁桃体、脑干等病料,经研磨或直接取水疱液,用PBS缓冲液制成1:5~1:10悬液,经抗生素处理或滤膜滤过后,接种适当的动物或细胞。最合适的动物是乳鼠。SVDV接种l~2日龄的乳鼠,可引起乳鼠出现神经症状并致死;接种7~9日龄的乳鼠不死者为本病。两者均死亡时为口蹄疫。分离SVDV最合适的细胞仅有猪肾原代细胞和IBRS-2等猪肾传代细胞,若出现细胞病变则可用ELISA或补体结合试验进行病毒抗原的检测,或用其他鉴定方法。但口蹄疫病毒不仅能在猪肾细胞上繁殖,也可在BHK-21和牛肾细胞上复制,据此,可区别诊断二者。     

(二)荧光抗体试验

      用直接和间接免疫荧光抗体试验,可检出猪淋巴结冰冻切片和涂片中的感染细胞,也可以检出水疱皮和肌肉中的病毒。   

(三)病毒中和试验

      SVDV中和试验是OIE推荐且为各国所接受的标准的血清学试验方法,也是国际贸易指定检测方法。其方法是:将已灭活的被检血清作2倍比系列稀释后,加入已接种SVDV的IBRS-2细胞中,37℃培养48h后,用显微镜观察判定结果;或培养3天后用10%福尔马林/盐水固定30min后,加入10%福尔马林配制的0.05%乙烯蓝(etheneblue)染色30min,冲洗后镜检,当对照接毒细胞蓝染,标准阳性血清中和对照及阴性对照细胞不着色时为试验成立。计算被检血清中和滴度,当中和滴度蕊1:11时为阴性;1:16~1:32时为可疑;)1:45时为阳性。     

(四)反向间接血凝试验

      本方法是用口蹄疫A、0、C型的豚鼠高免血清与猪水疙病血清免疫球蛋白(I药)致敏绵羊红细胞,制备成反向间接血凝试剂,使用该方法可在2~7h内快速鉴别诊断猪水疱病和口蹄疫。     

(五)补体结合试验

 用豚鼠制备的诊断血清与待检病料进行补体结合试验,可用于猪水疱病与口蹄疫的鉴别诊断。

      此外,双向免疫扩散试验、放射免疫扩散试验、对流免疫电泳试验、ELISA等也常用于猪水疱病的诊断。

七、防制

      控制本病的重要措施是防止将病带到非疫区。不从疫区调入猪只和猪肉产品。运猪和饲料的交通工具应彻底消毒。屠宰的下脚料和泔水等要经煮沸后方可喂猪,猪舍内应保持清洁、干燥,平时加强饲养管理,减少应激,加强猪只的抗病力。

      加强检疫、隔离、封锁制度:检疫时应做到两看(看食欲和跛行)、三查(查蹄、口、体温),隔离至少7天未发现本病,方可并入或调出,发现病猪就地处理,对其同群猪同时注射高免血清,并上报、封锁疫区。封锁一般于最后一头病猪恢复后20d才能解除,解除前应彻底消毒。

      免疫预防:对疫区和受威胁区的猪可采取疫苗接种的方法进行预防。我国目前制成的猪水疱病BEI灭活疫苗,平均保护率达96.15%。免疫期5个月以上。对受威胁区和疫区定期预防能产生良好效果,对发病猪,可采用猪水疱病高免血清预防接种,剂量为每公斤体重0.1~0.3mL保护率达90%以上。免疫期一个月。在商品猪中应用,可控制疫情,减少发病,避免大的损失。

      常用消毒药:0.5%农福、0.5%菌毒敌、5%氨水、0.5%次氯酸钠等均有良好消毒效果。国外有人认为氧化剂、酸、去垢剂混合应用,碘化物、酸、去垢剂适当混和消毒也有效。对于畜舍消毒还可用高锰酸钾、去垢剂的混合液。

      公共卫生学猪水疱病病毒与人的柯萨奇B5病毒密切相关,实验人员和饲养人员可因感染SVDV而得病,症状与柯萨奇B5病毒感染相似。近年来的研究表明,SVDV感染小鼠、猪和人后,都有不同程度的神经损害,因此,实验人员和饲养人员均应小心处理病毒和病猪,加强自身防护。

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